TTF1 all, Medycyna
[ Pobierz całość w formacie PDF ]Monoclonal
Mouse Anti-Rat
Thyroid Transcription
Factor (TTF-1)
Clone: 8G7G3/1
1
Nr kat. N1635
Przeciwciała pierwotne, gotowe do użycia
Do użytku z systemami detekcji DakoCytomation o wysokiej czułości.
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce
in vitro
.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Rat Thyroid Transcription Factor (TTF-1) są przeznaczone do
laboratoryjnej identyfikacji jakościowej komórek zawierających tarczycowy czynnik transkrypcyjny (TTF-1)
w komórkach prawidłowych i nowotworowych, przy użyciu mikroskopii świetlnej i metod
immunohistochemicznych (IHC). Dodatni wynik odczynu ułatwia klasyfikację nowotworów płuc i tarczycy.
Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem
kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany
patolog.
Streszczenie
i informacje ogólne
Tarczycowy czynnik transkrypcyjny-1 (TTF-1) należy do homeodomenowych czynników transkrypcyjnych
o wybiórczej ekspresji w komórkach tarczycy, płuc i międzymózgowia. Czynnik TTF-1 zidentyfikowano jako
regulator transkrypcji genów swoistych dla tarczycy. Wykazano również istotną rolę TTF-1 w aktywacji genów
swoiście kodujących procesy różnicowania w tkance płucnej.
2,3
Zobacz dokument „
Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych
” firmy
DakoCytomation lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury,
2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu,
5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu,
9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
N1635 (gotowy do użycia)
Przeciwciała przeciwko TTF-1 są dostępne w objętości 11 mL jako nadsącz hodowli tkankowej w buforze
Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,6, z dodatkiem białka stabilizującego i azydku sodu w stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: 8G7G3/1
1
Izotyp: IgG
1
, kappa
Ten produkt został zoptymalizowany pod kątem użycia z następującymi systemami detekcji DakoCytomation
o wysokiej czułości: numery katalogowe K4063, K4065, K5007, K5355 i K5005 (klienci spoza Ameryk mogą
używać numerów K5007 i K5005). Nie prowadzono testów opisywanego produktu z systemami barwienia
innymi niż opisane.
Immunogen
Rekombinowany czynnik transkrypcyjny TTF-1 szczura
1
Swoistość
Wykazano reaktywność monoklonalnych przeciwciał skierowanych przeciwko antygenom szczurzym, klon
8G7G3/1 (anty-TTF-1), z czynnikiem TTF-1 pochodzącym od szczurów, ludzi i myszy. W badaniu techniką
Western blot stwierdzono swoistą identyfikację pasm 40 kDa ekstraktów jąder komórkowych lub lizatów całych
komórek pochodzących z linii komórkowych wykazujących obecność TTF-1 – MLE 15 (mysie komórki
nabłonkowe płuc), H441-4 (ludzkie komórki raka gruczołowego płuc), H 345 (ludzkie komórki raka
drobnokomórkowego) oraz pneumocytów typu II pochodzących od szczurów. Nie stwierdzono reakcji z liniami
komórkowymi niewykazującymi ekspresji mRNA TTF-1, jak HeLa czy 3T3. Reaktywność przeciwciał przeciwko
TTF-1 również potwierdzono w testach ELISA z rekombinowanym TTF-1.
1
Materiały wymagane,
ale niedostarczane
Zobacz „
Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych
” firmy DakoCytomation i/lub
instrukcje do systemu detekcji. Do badań IHC z użyciem systemu detekcji DakoCytomation o wysokiej czułości
zalecana jest następująca kontrola ujemna:
Universal Negative Control, Mouse (nr kat. N1698)
(112775-001)
306358PL_010505 s. 1/3
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN
3
), w czystej postaci. Stężenie
NaN
3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN
3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie
wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do
przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków metali w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niż podane, Użytkownik powinien sprawdzić ich jakość.
Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na
materiale pochodzącym od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy
DakoCytomation.
Przygotowanie
próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko TTF-1 można stosować do badania skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych
w parafinie. Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce
cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Odmaskowanie antygenu polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym
uprzednio roztworze buforu i utrzymaniu temperatury w kąpieli wodnej (95–99°C), parowej (95–99°C) lub w
szybkowarze (121°C). Do cieplnego odmaskowania antygenu (HIER) można używać również innych źródeł
ciepła po zweryfikowaniu ich pod kątem zgodności z zalecaną procedurą. Zaleca się stosowanie procedury
40-minutowego ogrzewania w kąpieli wodnej w roztworze Target Retrieval Solution (nr kat. S1700) lub 10x
Concentrate (nr kat. S1699), w temperaturze 95–99°C. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do
szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Silanized Slides (nr kat. S3003). W celu uzyskania
optymalnych wyników zaleca się użycie przeciwciał przeciwko TTF1 do skrawków przechowywanych po
pocięciu nie dłużej niż 1 miesiąc.
Skrawki mrożakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko TTF-1 mogą być stosowane do odczynów na skrawkach mrożakowych utrwalonych
w acetonie lub utrwalonych rozmazach cytologicznych. Nie jest wymagane odmaskowanie antygenu.
Wykonanie odczynu
Pierwotne przeciwciała należy zastosować zgodnie z procedurą barwienia opisaną w instrukcji dołączonej do
używanego systemu detekcji. Wszystkie procedury inkubacji należy przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Zalecane czasy inkubacji dla tych przeciwciał:
Przeciwciała pierwotne
System detekcji
Chromogen
N1635
20 minut
K4063 / K4065
20 minut
DAB+
10 minut
20 minut
K5007
20 minut
DAB+
10 minut
10 minut
K5355
15 / 15 minut
LPR
10 minut
10 minut
K5005
15 / 15 minut
LPR
10 minut
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko TTF-1 dają odczyn jądrowy.
(112775-001)
306358PL_010505 s. 2/3
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe
Wykazano immunoreaktywność przeciwciał przeciwko TTF-1 z pneumocytami typu II oraz komórkami typu
Clara
płuc i komórek pęcherzykowych tarczycy oraz brak reaktywności z pozostałymi testowanymi
prawidłowymi tkankami. Stwierdzono brak ekspresji TTF-1 w następujących strukturach: przysadce mózgowej,
gruczole krokowym, jądrach, nadnerczach, skórze, sutku, nerkach, okrężnicy, wątrobie, trzustce, jelicie
cienkim, mózgu i żołądku.
1,4,5
Tkanki nieprawidłowe
Ekspresję TTF-1 potwierdzono metodami immunohistochemicznymi w komórkach nowotworowych
pochodzących z guzów płuc i tarczycy. Przeciwciała anty-TTF-1 wykazują dodatni odczyn z większością
drobnokomórkowych raków płuc oraz pierwotnych i przerzutowych raków gruczołowych płuc. Z kolei
immunoreaktywność stwierdza się w mniejszej części niezróżnicowanych wielkokomórkowych raków płuc
(26%).
1,6
Opisywano również dodatni odczyn z TTF-1 w raku płaskonabłonkowym płuc (14%).
7
Immunoreaktywność TTF-1 wykazano w większości atypowych rakowiaków płuc, natomiast występowała
rzadko w rakowiakach typowych.
6
Obecność czynnika TTF-1 stwierdzono również w 3/3 raki brodawkowatych
tarczycy.
1
Ekspresji TTF-1 nie stwierdzono w większości rodzajów innych analizowanych nowotworów – np.
pierwotnych raków sutka, przerzutach raków sutka w płucach, raków z komórek nerek, pierwotnych i
przerzutowych raków gruczołowych okrężnicy i gruczołu krokowego oraz międzybłoniakach złośliwych.
1,5,6,7,8
Po zastosowaniu przeciwciał poliklonalnych przeciwko TTF-1 stwierdzono pewną ogniskową
immunoreaktywność w 1/66 przypadków raka gruczołowego żołądka i 1/8 przypadków raka gruczołowego
trzonu macicy.
9
Piśmiennictwo
1. Holzinger A, Dingle S, Bejarano PA, Miller M-A, Weaver TE, Di Lauro R, Whitsett JA. Monoclonal antibody
to thyroid transcription factor-1: Production, characterization and usefulness in tumor diagnosis. Hybridoma
1996; 15(1):49–53
2. Lazzaro D, Price M, De Felice M, Di Lauro R. The transcription factor TTF-1 is expressed at the onset of
thyroid and lung morphogenesis and in restricted regions of the fetal brain. Development 1991;
113:1093–1104
3. Bohinski RJ, Di Lauro R, Whitsett JA. The lung-specific surfactant protein B gene promoter is a target for
thyroid transcription factor-1 and hepatocyte nuclear factor-3, indicating common factors for organ-specific
gene expression along the foregut axis. Mol Cell Biol 1994; 14(9):5671–5681
4. Khoor A, Whitsett JA, Stahlman MT, Stephenson M, Olson SJ, Cagle PT. Utility of surfactant protein B
precursor and thyroid transcription factor 1 in differentiating adenocarcinoma of the lung from malignant
mesothelioma. Hum Pathol 1999 Jun; 30(6):695–700
5. Anderson SS, Langel DJ, Gown AM, Prasad A, Savera A, Zarbo RJ. Thyroid transcription factor-1 (TTF-1)
is a more sensitive lung carcinoma marker than surfactant ApoA1. Lab Invest 1998; 78(1):171A(1001)
6. Folpe AL, Hansen D, Gown AM, Schmidt RA. Expression of thyroid transcription factor-1 (TTF-1) is
common in pulmonary atypical carcinoids and small cell carcinomas, but not typical carcinoids. Lab Invest
1998; 78(1):174A
7. Haque AK, Syed S, Lele SM, Freeman DH, Adegboyega PA. Immunohistochemical study of thyroid
transcription factor-1 and HER2/neu in non-small cell cancer: strong thyroid transcription factor-1
expression predicts better survival. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2002 Jun; 10(2):103–109
8. Bohinski RJ, Bejarano PA, Balko G, Warnick RE Whitsett JA. Determination of lung as the primary site of
cerebral metastatic adenocarcinomas using monoclonal antibody to thyroid transcription factor-1.
J Neuro-Oncol 1998;40(3):227-231
9. Bejarano PA, Baughman RP, Biddinger PW, Miller MA, Fenoglio-Preiser C, Al-Kafaji B, Di Lauro R,
Whitsett JA. Surfactant proteins and thyroid transcription factor-1 in pulmonary and breast carcinomas.
Mod Pathol 1996; 9(4):445–452
(112775-001)
306358PL_010505 s. 3/3
[ Pobierz całość w formacie PDF ]